Detectarea ADN de Toxoplasma gondii în sânge/lichid amniotic/LCR prin real-time PCR

Descriere

Informații generale

Test de biologie moleculară tip RT-PCR de detecție ADN Toxoplasma gondii izolat dintr-un singur prelevat (în funcție de caz).

Utilitate în confirmarea / diagnosticul unei:

– toxoplasmoze active sau dobândite foarte recent;

– toxoplasmoze congenitale prenatale;

– neurotoxoplasmoze la pacientul imunodeficitar.

Semnificație clinică:

Toxoplasma gondii este un protozoar intracelular obligatoriu, capabil să infecteze o varietate de gazde intermediare, inclusiv omul. Gazda definitivă este reprezentată de pisică; aceasta, odată infectată va elimina oochiști care devin infecțioși în sol.

Toxoplasmoza este dobândită de către om cel mai adesea digestiv:

• prin ingestia de carne crudă sau insuficient prelucrată termic, care conține chiști tisulari viabili;
• prin intermediul mâinilor murdare, în urma contactului cu pisica infectată / consumului de alimente sau apă contaminate cu oochiști din fecalele pisicii;
• rar prin consum de lapte crud / lactate nepasteurizate, contaminate cu tahizoiți viabili.

La femeia gravidă, cu primoinfecție recentă, dobândită în cursul sarcinii, există riscul de transmitere transplacentară a parazitului cu potențial de dezvoltare a unei toxoplasmoze congenitale. Incidența toxoplasmozei congenitale crește pe măsură ce sarcina avansează spre termen. În schimb, severitatea infecției congenitale variază invers proporțional cu vârsta sarcinii, fiind mai ridicată atunci când transmiterea transplacentara a parazitului a avut loc în primul trimestru de sarcină. Majoritatea sugarilor infectați in utero sunt asimptomatici la naștere, în special dacă infecția maternă a avut loc în timpul celui de-al treilea trimestru, sechelele apărând mai târziu în viață. Toxoplasmoza congenitală are ca rezultat o boală severă generalizată sau neurologică la aproximativ 20 % până la 30 % dintre sugarii infectați in utero. Aproximativ 10 % prezintă doar o implicare oculară, iar restul sunt asimptomatici la naștere. Infecția subclinică poate duce la naștere prematură și patologii neuropsihice sau audiologice subsecvente.

În urma unei infecției primare, cronic, parazitul poate rămâne într-o formă latentă de multiplicare în organismul gazdei, fără a induce vreo simptomatologie atâta timp cât pacientul rămâne imunocompetent. Infecțiile severe-fatale pot apărea în rândul pacienților imunodeficitari HIV+ în stadiul SIDA sau al persoanelor imunosupresate nonHIV. La acestă categorie de pacienți, în  cazul unei toxoplasmoze cronice-latente, poate avea loc fenomenul de reactivare a infecției, ce implică de obicei afectarea sistemului nervos central (neurotoxoplasmoză).

Proba:

1. minim 1 – 3 ml sânge venos recoltat pe EDTA (în vacutainer capac mov);
2. 0,5 ml lichid amniotic (în flacon steril fără prezervanți sau fixatori, necentrifugat); recoltare lichid amniotic conform procedurilor de recoltare prin amniocenteză (efectuată după 18 săptămâni de gestație, în condițiile unei infecții toxoplasmice materne dobândite recent).
3. minim 0,5 ml LCR (lichid cefalorahidian, în flacon steril, fără prezervanți sau fixatori, necentrifugat).

Toate prelevatele se refrigerează imediat după recoltare.

Condiţii de transport: tub steril; temperatura 2 – 8 °C. Tub secundar în container izoterm cu gheață umedă.

Prelevatele proaspăt recoltate pentru PCR trebuie trimise cât mai urgent la laboratorul de referință. (Proba de lichid poate fi transportată și la temperatura ambiantă de 20 °C, dacă este adusă la laborator în regim de urgență în câteva ore; în caz contrar, se respectă cele specificate mai sus). Interval de transport: maxim 24 de ore de la recoltare.

Timp eliberare rezultate: 2-14 zile (se lucrează în funcție de solicitări, o dată pe săptămână sau o dată la 2 săptămâni; timp analitic minim 48 de ore).

Interpretare rezultate / valori de referință:

Raportat negativ sau pozitiv:

• Un rezultat POZITIV indică prezența ADN-ului de Toxoplasma gondii în proba testată.
• Rezultatul NEGATIV indică absența ADN-ului specific în limitele detectabile, dar NU exclude prezența microrganismului sau a unei toxoplasmoze active sau recente.

Observații:

Rezultatele fiabile depind de recoltarea adecvată a probelor și de absența substanțelor inhibitoare. Sensibilitatea de detecție a testului este de 400 copii ADN/ml.

Rezultatele RT-PCR trebuie interpretate ținând cont de constatările clinice, imagistice și de laborator.

Interval de recoltare

Luni-Vineri: 07:30-11:00